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VDSpher 精睿/经典反相液相色谱分析柱
根据流动相和固定相相对极性不同,液相色谱分为正相色谱和反相色谱。如果采用固定相的极性大于流动相的极性,就称为正相色谱。由于极性化合物更容易被极性固定相所保留,所以正相色谱系统一般适用于分离极性化合物,极性小的组分先流出。正相色谱主要适用于非极性至中等极性的中小分子化合物的分离,在生化分析中主要应用于脂溶性维生素、甾体激素、医药等的分离分析;在农药、石油化工、精细化工、环境分析等方面也有广泛的应用。
正相色谱基本上可以被看做是液固吸附色谱,其柱填料是吸附剂,其表面上分布有活性吸附位点,溶剂和溶质分子均能被吸附于活性位点上。由于相互作用力有大有小,溶剂分子与溶质分子、溶质分子相互之间又存在竞争吸附,从而造成了在柱内保留时间的差异,使不同物质得到分离。
正相色谱一般用来分离中性化合物和离子(或可电离的)化合物,而且以中性样品为主。适于分离样品如下:①对于反相色谱法很难分离的异构体,可以采用以硅胶为固定相的正相色谱分离分析。②根据被分离样品极性差别进行族类分离。③易于水解样品的分离分析。④分离分析高脂溶性样品,其在极性有机溶剂中溶解度很小。⑤正相色谱也可以用于异构体分离(包括几何异构体和光学异构体)。
正相色谱是采用极性固定相(如带有二醇基、氨基、和氰基的固定相及硅胶),非极性流动相(如正己烷等)的分离方法。这是一种根据分子的极性大小将其分开的液相色谱技术,因为正相色谱以吸附效应作为分离的基础,所以也称为吸附色谱。在正相色谱中,样品分子与载体基质的硅醇基团发生特异的极性相互作用,与固定相产生强极性相互作用的极性样品分子比较难被洗脱,在柱内停留比较长的时间。反之极性较弱或非极性分子与硅胶之间产生相对较弱的相互作用,比较容易被洗脱,因而在柱内停留的时间较短。因此,正相色谱可以根据溶剂极性差别而达到分离的目的。
优良的正相色谱填料,应当具有以下基本特性:
① 表面具有极性活性基团即吸附位点
② 具有适宜形状,最好呈微米级微球形,且粒径分布均匀
③ 具多孔性并有高比表面积,以承载较大的样品负荷
④ 在操作条件下化学性质稳定
⑤ 具有高机械强度
在吸附色谱中最常用的填料是硅胶,硅胶的吸附选择性可以表现为多种形式,如分子量或分子尺寸选择性、功能团选择性、形状选择性、异构体选择性以及生化选择性等,影响吸附剂选择性的参数有:比表面积、平均孔径和表面活性。表面活性是正相色谱中作为填料的硅胶的一个重要参数,它主要依赖于表面硅羟基的类型、分布及其反应性。完全羟基化的表面具有最大的反应性,表面吸附的水或其他极性化合物,即使是极少量也会明显地降低表面活性。此外,比表面积相对较低的大孔硅胶,其表面硅羟基的分布一般较为均一。这是因为,在它们的制造过程中,通过热处理或烧结已使其无定形表面部分地具有能晶形的特征。微孔硅胶的表面不确定性较高,故其表面活性比大孔硅胶要高。
极性键合相系以硅胶为基质,表面键合以极性基团,如一NH基、一CN基、一CH(OH)一CH2OH基等而制成的填料,分别称为氨基、氰基、二醇基键合相填料,但其配基浓度一般较反相为低。依据表面修饰试剂和反应条件的不同,表面修饰层的浓度约在2~4 mol/m2。性键合相的配基比较复杂,因此在不同的流动相中会显示出不同的特性。与硅胶相比,上述极性化学键合相填料属于中等极性填料。由于有机配基对于硅胶表面的修饰,掩蔽了具有极高活性的硅羟基,使得极性化学键合相填料的稳定性和重现性有了较高的提高。极性键合相的极性通常弱于硅胶,所以更适于对中等极性物质的分离,其色谱条件选择的方便性和重复性均优于硅胶。在极性键合相色谱填料中,研究较多的是氨基键合相填料,它的吸附过程与Si02相似但又有所不同。由于氨基的极性比硅羟基弱,且氨基位于烷基链末端,有一定的自由度(这与Si02不同),加之氨基浓度亦较硅羟基浓度小,仅为2 mol/m2左右,故同一溶质于相同条件下在氨基柱上的保留要小一些,在分离酸性化合物,如酚、羧酸、核苷酸时较为有用。此外氨基键合相填料对某些物质的特定基团会表现出优异的选择性,例如可以用乙腈一水为洗脱剂在氨基键合相柱子上分离单糖。氰基柱对几何异构体或含双键数目不同的化合物(环状化合物)具有较好的分离能力。二醇基填料具有良好的生物相容性,更适于生化体系的分离,多数以硅胶为基质的凝胶过滤介质,均采用了二醇基填料。
德国VDS Optilab色谱技术公司是具有31年开发和生产液相色谱柱经验的企业,特别是运用正相液相色谱分离小分子化合物,产品品种和优化的选择更全面。用于小分子化合物色谱分离的C18固定相种类有9种、C8固定相种类有9种,按照硅胶纯度不同,区分VDSpher(经典)和VDSpher PUR(精睿)两大系列,是同类产品线领域中最全供应商之一。
VDSpher 经典/精睿正相液相色谱填料
1、正相液相色谱填料种类:
正相液相色谱填料 |
正相液相色谱填料键合类型 |
端基封尾技术 |
Silica |
--- |
no endcapping(不封尾) |
Diol |
二醇基 |
no endcapping(不封尾) |
CN |
氰基 |
no endcapping(不封尾) |
CN-SE |
氰基 |
Gas phase endcapping(全封尾) |
NH2 |
氨基 |
no endcapping(不封尾) |
AP |
no endcapping(不封尾) | |
DAP |
弱阴离子交换基团 |
no endcapping(不封尾) |
PEI |
弱阴离子交换基团 |
no endcapping(不封尾) |
2、CN液相色谱填料性能-高柱效:119,000/m,当今常规正相液相色谱柱最高柱效的代表。